Yöntem 1: Ekstraksiyon Yöntemi (Şu anda ülkemde uygulanan yöntem; daha düşük saflık sağlar ancak daha düşük üretim maliyeti sunar.)
Oksitosin Çözeltisinin Ekstraksiyonu: 100 g kurutulmuş arka hipofiz tozu ve 30 g kuvars tozu alın, bunları bir bilyeli değirmene yerleştirin ve damıtılmış su ekleyin. Aynı prosedürü kullanarak ekstraksiyonu dört kez gerçekleştirin. Her adım için eklenen damıtılmış suyun hacimleri şu şekildedir: İlk iki ekstraksiyon için 1,4 L ve sonraki iki ekstraksiyon için 1,3 L. Her ekstraksiyon 45 dakika süreyle gerçekleştirilir, ardından sıvının toplanması için santrifüjleme yapılır; kalan kalıntı daha sonra tekrar ekstraksiyona tabi tutulur. Ortaya çıkan dört ekstrakt oksitosin çözeltisini vermek üzere birleştirilir. Özetle: Kurutulmuş Arka Hipofiz Tozu [Su, Bilyalı Değirmen] → Oksitosin Ekstraktı → Kromatografik Ayırma.
1.500 g önceden-işlenmiş sentetik zeolit alın, 20 L %0,25 asetik asit çözeltisi ekleyin ve-karıştırdıktan sonra-karışımı bir iyon-değişim kolonuna dökün. Asetik asit çözeltisi seviyesi zeolit yatağının yüzeyinin 2-3 cm üzerindeki bir noktaya düştüğünde, hemen oksitosin ekstraktını ekleyin. Uygun bir akış hızı sağlayın ve ortaya çıkan beyaz, bulanık eluatı toplayın (bu fraksiyon öncelikle oksitosin içerir; oksitosinin izoelektrik noktası [pI] 7,7- iken vazopressinin pl'si 10,9'dur; vazopressin kolaylıkla pozitif iyonlar oluşturur ve bu nedenle kolona adsorbe edilir). Ekstraktın sıvı seviyesi zeolit yatağının yüzeyine düşer düşmez derhal damıtılmış su ekleyin ve akış durana kadar bulanık eluatı toplamaya devam edin. Toplanan bulanık eluatın pH'ını buzlu asetik asit kullanarak 3,5'e ayarlayın. Çözeltiyi bir su banyosunda hızlı bir şekilde 95 dereceye ısıtın, bu sıcaklığı 3 dakika boyunca koruyun, ardından çözeltiyi hızla soğutun ve gece boyunca buzdolabında saklayın. Özetle: Oksitosin Ekstraktı [HAc, Sentetik Zeolit Sütunu] → Bulanık Elüat [HAc, Isıtma] → Ayrılmış Çözelti → Adsorpsiyon ve Elüsyon. Ertesi gün soğutulmuş çözeltiyi filtreleyin. Süzüntüye, karıştırırken %10 bentonit bulamacı ekleyin (100 mL filtrat başına 3 mL bulamaç ekleyerek). Adsorpsiyonu kolaylaştırmak için 1 saat boyunca karıştırmaya devam edin, ardından karışımı santrifüjleyin. Süpernatan sıvıyı bir sülfosalisilik asit reaktif çözeltisi kullanarak test edin; herhangi bir çökeltinin yokluğu adsorpsiyon işleminin tamamlandığını gösterir. Adsorpsiyon tamamlanmadıysa bentonit arıtma işlemini tekrarlayın; daha sonra her iki adsorpsiyon adımından elde edilen bentonit çökeltilerini birleştirin. Bentonit, %1 asetik asit (sırasıyla 1,6 L, 1,4 L, 1,2 L ve 0,8 L hacimlerle) kullanılarak dört kez elute edilir. Her bir eluat için *tert*-butiltriklorür, solüsyon 80 dereceye ısıtıldığında eklenir; daha sonra sıcaklık 95 dereceye yükseltilir, hızla 25 dereceye soğutulur ve filtrelenir veya santrifüj edilir. Ortaya çıkan dört filtrat, gücü ve vazopressin sınırını belirlemek için birleştirilir. Proses akışı şu şekildedir: Soğutulmuş Çözelti [Filtreleme] → Filtrat [Bentonit Bulamacı] → Adsorbat [%1 HAc] → Eluat. Oksitosin Enjeksiyonunun Hazırlanması:
Kalite standartlarını karşılayan, test edilen oksitosin çözeltisi, 5 U/mL veya 10 U/mL'lik bir konsantrasyona kadar seyreltilir. Daha sonra Hayır. 4 veya Hayır. 5 sinterlenmiş cam huniden süzülür, ampullere doldurulur ve nihai ürünü elde etmek için 100 derecede 30 dakika boyunca akan buhar kullanılarak sterilize edilir. Proses akışı şu şekildedir: Oksitosin Solüsyonu (Tahlil Onaylandı) [Filtrasyon, Doldurma, Sterilizasyon] → Oksitosin Enjeksiyonu.
Sentetik Zeolitin Rejenerasyonu: Sentetik zeolit iki kez distile su ile yıkanır. Daha sonra 1,5 L su (500 g zeolit baz alınarak hesaplanmıştır) ve 150 g sodyum klorür eklenir ve karışım, yıkanıp vazopressinin uzaklaştırılması için 2 saat boyunca karıştırılır. Zeolit daha sonra hiçbir klorür iyonu kalmayıncaya kadar damıtılmış su ile yıkanır. Uygun miktarda su eklenir ve sodyum hidroksit kullanılarak pH 9'a ayarlanır; karışım 30 dakika karıştırıldıktan sonra süpernatan boşaltılır. Zeolit damıtılmış su ile yıkanır, sülfürik asit kullanılarak pH 5,5-6'ya ayarlanır ve neredeyse nötr hale gelinceye kadar tekrar su ile yıkanır. Daha sonra fazla suyu uzaklaştırmak için filtrelenir ve ileride kullanılmak üzere 105 derecede kurutulur. Kullanmadan önce uygun miktarda su eklenir ve ıslanmaya izin vermek için karıştırılarak buzlu asetik asit kullanılarak pH ayarlanır. %10 Bentonit Bulamacının Hazırlanması: Bentonit ve su, 1:10 kütle/hacim oranında karıştırılır. Karışım yaklaşık 1 saat boyunca öğütülür ve bu süre zarfında 3.5'lik sabit bir pH'ı korumak için asetik asit eklenir. Elde edilen bulamaç daha sonra gelecekte kullanılmak üzere bir buzdolabında saklanır. Yöntem 2: Kimyasal Sentez. İlk olarak, heptapeptid amid (bölüm 3-9) benziloksikarbonil-lösin *p*-nitrofenil esterden başlayarak sentezlenir; daha sonra benziloksikarbonil-S-benzilsistein-tirozin azit (bölüm 1-2) sentezlenir; ve üçüncü aşamada oksitosin sentezlenir.